文章摘要:目的 构建pCDH-Flag-NGFP-TERT，pCDH-Myc-TPP1-CGFP基因的真核表达载体，验证TPP1-CGFP蛋白能募集到端粒区，并通过GFP蛋白自发重建检测TERT与TPP1的相互作用。方法 以相应质粒为模板，采用PolymeraseChainReaction（PCR）技术扩增出NGFP、CGFP、TPP1的CDS区编码序列。通过酶切、重组将NGFP插入到pCDH-Flag-TERT载体上，将TPP1-CGFP插入到pCDH-Myc-POT1-v5tag载体上。经菌液PCR、载体酶切及测序验证后转染到293T细胞中，采用蛋白质印迹法检测其表达，免疫荧光和端粒Fish验证TPP1-CGFP能募集到端粒区，将TPP1-CGFP与NGFP-TERT共转重新组装成GFP蛋白验证其相互作用。结果 双酶切结果显示载体构建成功；WB结果显示蛋白成功表达；免疫荧光及端粒Fish显示TPP1-CGFP能募集到端粒区，质粒共转能重新组装成GFP蛋白说明两者有相互作用。结论 真核表达载体构建成功，并证明TPP1-CGFP能募集到端粒区，且拆分后的GFP蛋白能由连接蛋白的相互作用而重新组装并发绿色荧光，为研究端粒酶与TPP1蛋白及端粒的相互作用提供了可视化的细胞模型。
文章关键词:拆分绿色荧光蛋白,端粒,端粒酶,TPP1,
项目基金:国家自然科学基金（82072717）,
论文作者:李江波1 王诗昆3 金蕊1 程龙1 郭鸿斌2
作者单位:3. 新疆军区信息通信旅 2. 陆军边防第三六一团卫生队
论文DOI: 10.13523/j.cb.2108008
论文分类号: Q78
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